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AVANZADO DE HPLC en Estado de México

LEACSA

Programa de AVANZADO DE HPLC

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Impartido en: Estado de México

Temario

PROGRAMA:



1 - FUNDAMENTOS TEÓRICOS DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS



1.1 - Relación fundamental de la cromatografía



1.2 - Principales parámetros cromatográficos

. tiempo y volumen de retención

. factor de capacidad

. coeficiente de distribución



1.3 - Teoría del ensanchamiento de banda

. modelización de la columna cromatográfica

. eficiencia y número de platos teóricos

. factores que afectan la eficiencia

. curva de Van Deemter con variables reducidas y reales



1.4 - Resolución

. expresión de la resolución

. factores que afectan la resolución



1.5 - Presión en HPLC

. ley de Darcy

. influencia de los diferentes parámetros sobre la presión



1.6 - Consecuencias de la HPLC sobre la instrumentación

. volumen del pico cromatográfico

. eficiencia observada/eficiencia real

. congruencia del sistema con respecto a la columna

. reglas generales sobre volúmenes muertos

. presión





2 - MECANISMOS DE RETENCION EN CROMATOGRAFIA DE INTERACCION



2.1 - Termodinámica de las disoluciones

. parámetros termodinámicos

. interacciones solvente/solvente y soluto / solvente

. parámetro de solubilidad

. noción de polaridad, escalas de polaridad



2.2 - Mecanismo de retención de tipo fase normal, cromatografía de

adsorción

. adsorbentes, estructura

. interacciones en fase estacionaria

. modelo de retención de SNYDER

. escala eluotrópica

. actividad de la fase estacionaria

. equilibrio de distribución del agua

. noción de disolventes isoactivantes



2.3 - Mecanismo de retención de tipo fase normal, cromatografía en

fases injertadas o impregnadas

. las fases estacionarias

. interacciones

. escala eluotrópica

. diferencias de comportamiento entre fases



2.4 - Intercambio iónico

. mecanismo de retención, constante de distribución

. intercambio de cationes, escala eluotrópica

. intercambio de aniones, escala eluotrópica

. las fases de intercambio iónico

. mecanismos secundarios del intercambio iónico: equilibrio de Donnan

. exclusión de iones, intercambio de ligandes

. ejemplos



2.5 - Mecanismo de retención de tipo fase inversa

. efecto hidrofóbico

. aplicación al mecanismo de retención en fase inversa

. fases estacionarias

. parámetros que rigen la retención

. predicción de la retención

. retención/solubilidad



2.6 - Cromatografía de pares de iones

. cromatografía de fase inversa con moléculas ionizables

. influencia del PH

. adsorción del reactivo de pares de iones

. mecanismos de retención

. parámetros que rigen la retención



2.7 - Fases inversas reales : mecanismos mixtos

. mecanismo secundario de fase normal : ventajas/desventajas

. tratamiento secundario de la fase estacionaria : "end capping"

. fase estacionaria de tipo "base desactivated"

. nuevas generaciones de fases con sílices ultra puras, consecuencias

sobre la retención y eficiencia

. nuevas generaciones de fases con mecanismo mixto inducido

. otras fases estacionarias



2.8 - Fases normales reales : mecanismos mixtos

. mecanismos secundarios de fase inversa con fases normales

ventajas/desventajas

. caso particular de la fase amino : 3 mecanismos simultáneos



2.9 - Cromatografía de moléculas de alto peso molecular

. límites de la HPLC clásica

. fase de diámetro de poros grande

. aplicación a la separación de polipéptidos y proteínas



2.10 - Fases comerciales

. las diferentes generaciones de sílices comerciales,

. descripción de la estructura de las fases comerciales más comunes.





3 - MECANISMO DE RETENCION EN CROMATOGRAFIA DE PERMEACION



3.1 - Base teórica

. parámetros cromatográficos

. termodinámica de la retención

. mecanismo de retención, peso molecular, volumen hidrodinámico



3.2 - GPC de polímeros no solubles en agua

. fases y columnas

. calibración, modelización



3.3 - GPC de polímeros solubles en agua

. fases y columnas

. problemas específicos



3.4 - GPC de polipéptidos y proteínas

. fases y columnas

. pH, fuerza iónica y aditivos en fase móvil





4 - CROMATOGRAFIA DE MOLECULAS QUIRALES



4.1 - Reglas generales

. puntos de interacción

. interacción quiral



4.2 - Separación con fase móvil quiral

. ejemplos



4.3 - Separación con fase estacionaria quiral

. fases tipo PIRKLE

. fases tipo celulosa

. fases tipo proteína

. fases tipo ciclodextrina





5 - DESARROLLO Y OPTIMIZACION DE LA SEPARACION CROMATOGRAFICA



5.1 - Selección de la técnica cromatográfica

. principales criterios de selección

. criterios de selección en función de la estructura de los solutos



5.2 - Optimización de la separación

. resolución

. tiempo de análisis

. modelos matemáticos

. gradiente de concentración de fase móvil

. costo





6 - PREPARACIÓN DE MUESTRA



6.1 - Compatibilidad de la muestra con respecto al sistema cromatográfico



6.2 - Técnicas de preparación

. clásicas

. derivatización

. micro columnas



6.2 - Cromatografía bidimensional

. "Back flush"

. purificación y concentración en línea

. "heart cutting"





7 - ANALISIS CUANTITATIVO



7.1 - Respuesta del detector

. relación fundamental

. medida de la superficie y altura de pico

. precisión

. normalización interna



7.2 - Método del estándar externo

. principio, cálculo

. precisión



7.3 - Método del estándar interno

. principio, cálculos

. precisión



7.4 - Método de adición patrón

. principio, cálculos

. precisión



7.5 - Curva de calibración

. propósito, interés

. uso según el método





8 - VALIDACION DEL METODO



8.1 - Generalidades

. definición

. criterios preliminares

. plan de validación



8.2 - Parámetros de evaluación

. precisión

. exactitud

. límite de detección

. límite de cuantificación

. linealidad

. selectividad específica

. solidez
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